影響ELISA試劑盒試驗成果的要素

　　影響ELISA試劑盒試驗成果的要素

　　以下是天正信達(dá)對影響ELISA試劑盒試驗成果的關(guān)鍵要素及控制方法，綜合多篇文獻(xiàn)整理：

　　一、試劑相關(guān)因素

　　抗體/抗原質(zhì)量‌

　　抗體效價下降或交叉反應(yīng)會導(dǎo)致假陽性/假陰性

　　控制方法：選擇高特異性抗體，避免使用過期試劑

　　酶結(jié)合物濃度‌

　　濃度過高易致背景信號增強，過低則靈敏度下降

　　控制方法：嚴(yán)格按說明書稀釋，不同批號禁止混用

　　試劑保存條件‌

　　未避光保存或反復(fù)凍融會使底物失效

　　控制方法：開封后1個月內(nèi)用完，酶標(biāo)試劑需-20℃保存

　　二、樣本處理因素

　　溶血/脂血干擾‌

　　血紅蛋白類過氧化物酶活性會干擾HRP系統(tǒng)

　　控制方法：3000g離心20分鐘去除雜質(zhì)

　　反復(fù)凍融‌

　　超過3次凍融可使蛋白降解(尤其細(xì)胞因子)

　　控制方法：分裝凍存于-80℃，避免溫度波動

　　抗凝劑選擇‌

　　EDTA會抑制HRP活性，肝素增加OD值

　　控制方法：血清樣本優(yōu)先，血漿需匹配抗凝劑類型

　　三、操作技術(shù)要點

　　加樣準(zhǔn)確性‌

　　移液器未校準(zhǔn)可使誤差>5%(尤其微量樣本)

　　控制方法：每年校準(zhǔn)移液器，加樣至孔底1/3處

　　溫育控制‌

　　溫度波動>1℃或未密封會導(dǎo)致"邊緣效應(yīng)"

　　控制方法：使用水浴箱，禁止疊放反應(yīng)板

　　洗滌充分性‌

　　殘留洗滌液會增高背景(假陽性)

　　控制方法：手工洗板需拍干，洗板機(jī)檢查針頭堵塞

　　四、儀器與環(huán)境

　　酶標(biāo)儀校準(zhǔn)‌

　　濾光片波長偏差(如TMB用450nm非490nm)

　　控制方法：開機(jī)預(yù)熱15分鐘，定期校驗

　　溫濕度控制‌

　　濕度>70%易致板條受潮，<40%加速液體蒸發(fā)

　　控制方法：實驗室維持45%-65%濕度

　　五、特殊注意事項

　　組織樣本處理‌

　　假陽性排查‌

　　類風(fēng)濕因子干擾需用阻斷劑處理

　　驗證方法：加標(biāo)回收率測試(80%-120%)

　　關(guān)鍵建議‌：

　　每板設(shè)置復(fù)孔(CV<15%)和陰陽性對照

　　顯色時間控制在10-15分鐘，強陽性孔提前終止

　　優(yōu)先選擇被CNS論文引用的試劑盒品牌

　　注：以上資料僅供參考，具體請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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