對于超低lgG胎牛血清的詳解

　　這是一個在特定生命科學(xué)研究領(lǐng)域中非常重要的專用試劑。我們將從定義、為何需要它、如何生產(chǎn)、關(guān)鍵應(yīng)用、如何選擇以及注意事項等多個角度進行解析。

　　一、 什么是超低IgG胎牛血清?

　　它是胎牛血清 的一個特殊級別，其核心特征是免疫球蛋白G(IgG)的含量被極大地降低，通常遠(yuǎn)低于標(biāo)準(zhǔn)級別的胎牛血清。

       名稱                貨號         規(guī)格    儲存條件

　　超低 IgG 胎牛血清   FBS-SG500    500ml   -20°C

　　胎牛血清(FBS)：是從母牛剖腹取出的胎牛心臟中穿刺獲取的血液，經(jīng)自然凝結(jié)、離心后去除血細(xì)胞、纖維蛋白等成分后得到的淡黃色上清液體。它是細(xì)胞培養(yǎng)中常用、有效的天然培養(yǎng)基添加劑，提供細(xì)胞生長所必需的生長因子、激素、營養(yǎng)物質(zhì)和附著因子。

　　免疫球蛋白G(IgG)：是血清中最主要的一類抗體，是動物機體免疫應(yīng)答的重要組成部分。但在細(xì)胞培養(yǎng)的某些應(yīng)用中，它會成為嚴(yán)重的干擾因素。

　　“超低"通常沒有一個全球統(tǒng)一的絕對值標(biāo)準(zhǔn)，但主流供應(yīng)商提供的產(chǎn)品其IgG濃度一般低于5 μg/mL，有些甚至可低于1-2 μg/mL。而普通FBS的IgG含量通常在100-500 μg/mL范圍。

　　二、 為什么需要去除IgG?——核心原因

　　在大多數(shù)常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)中，標(biāo)準(zhǔn)FBS中的IgG不會造成問題。但在以下兩類關(guān)鍵應(yīng)用中，IgG的存在會帶來嚴(yán)重干擾：

　　免疫學(xué)實驗的干擾(最主要原因)

　　抗體相關(guān)實驗：如免疫沉淀(IP)、共免疫沉淀(Co-IP)、Western Blot、免疫熒光(IF)、流式細(xì)胞術(shù) 等。這些實驗都需要使用抗體(通常也是IgG)來特異性識別靶蛋白。

　　問題所在：血清中殘留的牛IgG可能會與實驗中加入的抗體發(fā)生交叉反應(yīng)。

　　與二抗反應(yīng)：實驗中使用的抗體制備的二抗(如兔抗小鼠IgG)無法區(qū)分小鼠IgG和牛IgG，會非特異性地結(jié)合到牛IgG上，導(dǎo)致背景信號高，條帶模糊，結(jié)果無法解讀(例如WB中出現(xiàn)多條非特異條帶或高背景)。

　　與Protein A/G/A-L 珠子反應(yīng)：IP/Co-IP實驗中使用Protein A或G珠子來吸附抗體-抗原復(fù)合物。Protein A/G對多種物種的IgG的Fc段都有高親和力，同樣會強烈地、非特異性地吸附血清中的牛IgG，不僅增加背景，還會競爭性消耗珠子結(jié)合位點，降低目標(biāo)蛋白的捕獲效率。

　　某些特殊細(xì)胞培養(yǎng)的需求

　　在培養(yǎng)一些本身會分泌IgG的細(xì)胞時(如雜交瘤細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞)，外源性的牛IgG會干擾對細(xì)胞自身分泌IgG的定量和分析。

　　在研究細(xì)胞自身免疫應(yīng)答或信號通路時，外源IgG可能作為一種非特異性刺激物，激活某些細(xì)胞表面的Fc受體，從而干擾實驗結(jié)果。

　　三、 如何生產(chǎn)出超低IgG血清?——主要工藝

　　降低血清中IgG含量的核心技術(shù)是色譜純化技術(shù)，最常見的是：

　　親和色譜：使用Protein G 或 Protein A 瓊脂糖凝膠作為色譜柱填料。Protein G/A對IgG的Fc段具有高的特異性和親和力。當(dāng)血清流經(jīng)色譜柱時，IgG被特異性捕獲并留在柱子上，而其他血清成分(生長因子、激素等)則流過并被收集起來。最終收集到的流出液就是IgG含量極低的血清。

　　其他方法：也可能結(jié)合離子交換色譜或其他物理化學(xué)方法進行進一步純化。

　　重要提示：這個純化過程在去除IgG的同時，不可避免地也會損失一部分其他有價值的成分，尤其是某些與IgG結(jié)合或性質(zhì)相似的生長因子和蛋白。因此，超低IgG血清在支持細(xì)胞生長方面可能略遜于未經(jīng)處理的頂級標(biāo)準(zhǔn)FBS。供應(yīng)商會努力優(yōu)化工藝以最大限度地保留生長支持能力。

　　四、 主要應(yīng)用領(lǐng)域

　　蛋白質(zhì)相互作用研究：Co-IP 和 IP 實驗的血清，能顯著降低非特異性結(jié)合，提高信噪比。

　　蛋白質(zhì)免疫印跡：特別是當(dāng)檢測的蛋白分子量與IgG重鏈(~55 kDa)或輕鏈(~25 kDa)接近時，使用超低IgG血清可避免來自血清IgG的干擾條帶，使結(jié)果清晰可靠。

　　流式細(xì)胞術(shù)：用于細(xì)胞表面或胞內(nèi)抗原的檢測，能降低非特異性熒光背景，使細(xì)胞群分群更清晰。

　　免疫細(xì)胞化學(xué)/免疫熒光(ICC/IF)：減少背景染色，提高成像質(zhì)量。

　　雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)與抗體生產(chǎn)：便于準(zhǔn)確測定雜交瘤細(xì)胞自身產(chǎn)生的單克隆抗體，避免牛IgG的污染。

　　病毒學(xué)研究：某些病毒培養(yǎng)和中和實驗中也需避免抗體干擾。

　　五、 如何選購和使用?

　　確認(rèn)必要性：并非所有細(xì)胞培養(yǎng)都需要。只有在進行上述免疫學(xué)實驗或培養(yǎng)特殊細(xì)胞時才有必要使用。常規(guī)細(xì)胞傳代擴增使用標(biāo)準(zhǔn)FBS更經(jīng)濟。

　　關(guān)注關(guān)鍵指標(biāo)：

　　IgG濃度：要求供應(yīng)商提供CoA(分析證書)，確認(rèn)其IgG含量確實達到“超低"水平(如<5 μg/mL)。

　　細(xì)胞生長性能測試：通過查閱CoA，了解該批血清對常見細(xì)胞系(如CHO、HeLa、Vero、MSC等)的生長支持效率(倍增時間、飽和密度等)，確保其能滿足你的細(xì)胞生長需求。

　　內(nèi)毒素含量：內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁成分，對細(xì)胞有毒性。超低IgG血清的內(nèi)毒素水平也應(yīng)較低(如<10 EU/mL)。

　　進行測試：在大規(guī)模使用前，務(wù)必先用你的特定細(xì)胞系和實驗方法進行測試，驗證其生長性能和降低背景的效果。

　　注意兼容性：確保實驗中所用的抗體(一抗和二抗) 不會與可能殘留的微量牛IgG發(fā)生交叉反應(yīng)。例如，如果你的二抗是“抗牛IgG"，那么顯然不能使用任何胎牛血清。

　　注：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。 Elisa試劑盒

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