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      ELISA實驗“避坑”手冊:樣本處理中的關鍵細節

      更新時間:2025-10-27  |  點擊率:555
        ELISA實驗“避坑”手冊:樣本處理中的關鍵細節
       
        ELISA實驗中樣本處理是影響結果準確性的關鍵環節,以下是常見樣本類型的處理要點及避坑指南:
       
        一、血清樣本處理
       
        靜置與離心‌:全血需室溫靜置2小時或4℃過夜使細胞沉降,隨后以2000g離心10分鐘獲取上清‌。
       
        避坑:未離心直接加樣會導致雜質干擾,離心后需避免吸到沉淀層。
       
        儲存條件‌:短期存放建議2-8℃(≤1周),長期保存需分裝后-20℃(1個月內)或-80℃(1個月以上)‌。
       
        二、血漿樣本處理
       
        抗凝與離心‌:采集后需立即加入抗凝劑(如EDTA),30分鐘內以1000g離心15分鐘‌。
       
        避坑:抗凝劑選擇不當(如肝素可能干擾檢測)或離心延遲會導致纖維蛋白原殘留。
       
        凍存注意‌:避免反復凍融,建議分裝后-80℃保存‌。
       
        三、組織樣本處理
       
        勻漿方法‌:取100mg組織,用PBS沖洗后研磨或超聲裂解,結合反復凍融(2次)破壞細胞膜‌。
       
        避坑:組織塊未充分勻漿會導致目標蛋白釋放不全,影響檢測靈敏度。
       
        離心參數‌:低溫離心(4℃)后取上清,避免脂質或細胞碎片干擾‌。
       
        四、通用注意事項
       
        樣本污染‌:操作需無菌,避免細菌或外源蛋白引入假陽性。
       
        稀釋優化‌:高濃度樣本需預實驗確定稀釋倍數,確保檢測值在標準曲線范圍內。
       
        凍融控制‌:反復凍融不超過3次,避免蛋白降解‌。
       
        通過規范樣本處理流程,可顯著減少假陽性/陰性結果,提升ELISA數據的可靠性‌。
       
        注:以上僅供參考,不作為實際數據,實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。
       
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