雞沙門氏菌抗體(Salmonella-Ab)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū) 一、實(shí)驗(yàn)原理 本試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術(shù)，通過(guò)預(yù)包被沙門氏菌抗體的微孔板與樣本中的目標(biāo)抗體結(jié)合，再通過(guò)酶標(biāo)二抗顯色反應(yīng)，最終通過(guò)吸光度值定量檢測(cè)雞血清/血漿中的沙門氏菌抗體水平。 二、試劑盒組成 組分規(guī)格保存條件 預(yù)包被微孔板96T/48T2-8℃密封 標(biāo)準(zhǔn)品(含陰性/陽(yáng)性對(duì)照)6瓶(0-8.1ppb梯度)2-8℃ 酶標(biāo)二抗6ml2-8℃避光 TMB底物液A/B各6ml2-8℃避光 終止液(2M溶液)6ml室溫 濃縮洗滌液(20×)20ml2-8℃ 三、樣本處理 血清/血漿：采集后室溫靜置2小時(shí)或4℃過(guò)夜，1000×g離心20分鐘，取上清-20℃保存(避免反復(fù)凍融)。 組織勻漿：按1:9比例加入PBS，冰上研磨后5000×g離心5分鐘取上清。 注意事項(xiàng)：溶血樣本需離心過(guò)濾后使用。 四、操作步驟 加樣 標(biāo)準(zhǔn)品孔：加入50μL不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品(0-8.1ppb) 。 樣本孔：先加40μL稀釋液，再加入10μL樣本(終稀釋度5倍)。 孵育：37℃避光孵育60分鐘，封板膜密封。 洗滌：棄液后每孔加滿洗滌液，靜置30秒，重復(fù)5次，拍干。 顯色：每孔加TMB底物A/B各50μL，37℃避光顯色15分鐘。 終止：每孔加50μL終止液，立即測(cè)定OD450值。 五、關(guān)鍵注意事項(xiàng) 移液精度：使用校準(zhǔn)后的移液槍(誤差<2%)，槍頭需“一頭一換。 溫度控制：試劑需提前30分鐘恢復(fù)室溫，避免水浴加熱。 避光操作：TMB底物全程避光，顯色時(shí)用錫紙覆蓋酶標(biāo)板。 安全防護(hù)：終止液含強(qiáng)酸，需戴手套操作。 六、結(jié)果分析 以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ppb)為橫坐標(biāo)，OD450值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 樣本濃度通過(guò)曲線方程計(jì)算，OD值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍時(shí)需稀釋復(fù)測(cè)。 七、貯存與有效期 未開(kāi)封試劑盒：2-8℃保存6個(gè)月。 開(kāi)封后微孔板：密封干燥保存，避免受潮。 | 
