大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒實驗使用說明書 BS-3008 大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒 以下是?大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒?的實驗使用說明書綜合整理： 一、實驗原理? 采用?雙抗體夾心法?或?固相夾心法?ELISA技術(shù)。通過包被抗體捕獲樣本中的TNF-β，再與酶標(biāo)抗體形成復(fù)合物，經(jīng)TMB顯色后，顏色深淺與TNF-β濃度成正比。 二、試劑盒組成? 核心組分?： 預(yù)包被微孔板(96孔) 標(biāo)準(zhǔn)品(濃度梯度：15.6~1000 pg/mL，凍干品需復(fù)溶) 酶標(biāo)抗體(HRP標(biāo)記) 顯色底物(TMB A/B) 終止液(2N H?SO?) 濃縮洗滌液(20×~30×) 需自備器材?： 酶標(biāo)儀(450nm)、移液器(10~1000μL) 37℃恒溫箱、離心機(2000~5000×g) 三、樣本處理? 血清/血漿?：全血室溫靜置2小時后離心(1000×g，20分鐘)，避免溶血或脂血。 組織勻漿?：按1:9(重量:體積)加入PBS勻漿，離心取上清。 保存?：短期存于4℃，長期需分裝凍存于-20℃(避免反復(fù)凍融)。 四、操作步驟? 試劑準(zhǔn)備?： 復(fù)溫：所有試劑室溫平衡30分鐘。 稀釋洗滌液(如20×→1×)。 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?： 按說明書梯度稀釋(如1000→500→250 pg/mL)。 加樣與溫育?： 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本(100μL/孔)，37℃孵育90分鐘。 洗滌3次(每孔加洗滌液靜置1分鐘后甩干)。 顯色與檢測?： 加TMB底物(90μL/孔)，避光反應(yīng)15分鐘→終止液(50μL/孔)。 酶標(biāo)儀讀取OD450nm值。 五、注意事項? 關(guān)鍵控制點?： 移液精度誤差≤2%，避免氣泡干擾。 顯色液需避光現(xiàn)配，終止液傾倒緩慢防濺。 數(shù)據(jù)計算?： 以標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合樣本濃度(推薦四參數(shù)邏輯曲線)。 保存條件?： 未開封試劑盒：2-8℃保存6個月;開封后板條需密封防潮。 六、常見問題? 顯色異常?：檢查底物是否過期或污染。 高背景值?：洗滌不或樣本濃度過高(需稀釋)。 注：以上資料僅供參考，如需具體品牌試劑盒的完整說明，可咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商的詳細(xì)文檔。 | 
