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      大鼠Ki-67蛋白(Ki67P)ELISA試劑盒實驗使用說明

      發表時間:2025/9/26  |  點擊率:171
       
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        大鼠Ki-67蛋白(Ki67P)ELISA試劑盒實驗原理

        大鼠Ki-67蛋白(Ki67P)ELISA試劑盒的實驗原理主要基于?雙抗體夾心法?,通過特異性抗體捕獲目標蛋白并顯色定量。以下是詳細解析:

        一、核心檢測原理

        抗體包被?

        試劑盒預包被抗Ki-67蛋白的單克隆抗體于酶標板微孔中,形成固相捕獲層?。

        抗原-抗體結合?

        樣本或標準品中的Ki-67蛋白與包被抗體特異性結合,形成“抗體-抗原"復合物?。

        信號放大?

        加入生物素標記的二抗(抗Ki-67多克隆抗體),與已結合的抗原形成“抗體-抗原-二抗"復合物?。

        通過鏈霉親和素-生物素-過氧化物酶(SA-ABC)系統進一步放大信號?。

        顯色與定量?

        加入TMB顯色底物后,酶催化反應生成藍色產物,終止液變黃,在450nm波長下檢測吸光度(OD值),Ki-67濃度與OD值呈正比?。

        二、關鍵組分與流程

        試劑盒組分?:包被抗體、生物素化二抗、SA-ABC復合物、TMB底物、終止液等?。

        操作步驟?:

        樣本稀釋與加樣

        37℃孵育(通常1小時)

        洗滌去除未結合物質

        加入二抗與SA-ABC復合物

        顯色反應后終止并讀數

        三、技術特點

        高特異性?:雙抗體夾心法可減少交叉反應,提高檢測準確性?。

        靈敏度?:檢測范圍通常為0.312-20ng/mL,適用于低豐度蛋白檢測?。

        標準化?:需通過標準曲線計算樣本濃度,確保結果可比性?。

        四、注意事項

        樣本處理?:避免反復凍融,建議使用新鮮組織或血清樣本?。

        干擾因素?:高濃度內源性生物素或異嗜性抗體可能影響結果,需通過稀釋或阻斷劑處理?。

        如需進一步了解Ki-67的生物學功能或臨床意義,可參考免疫組化檢測的相關研究?。

        注:僅供科研使用,以上資料供參考,如需具體產品說明請咨詢技術老師或品牌供應商。

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