ELISA試劑盒的測定方法及要求

　　標簽：Elisa 本生試劑盒 標準品 抗體 封板膜 一次性吸頭

　　以下是天正信達ELISA試劑盒的測定方法及要求的詳細說明：

　　一、測定方法?

　　標準品稀釋與加樣?

　　在酶標包被板上設(shè)標準品孔，加入不同濃度的標準品溶液。

　　待測樣本需用稀釋液適當稀釋后加入對應(yīng)孔中，避免濃度過高影響檢測線性。

　　孵育?

　　用封板膜密封后置于37℃恒溫環(huán)境孵育30-90分鐘(具體時間依試劑盒說明)。

　　孵育時需保持板孔水平，避免液體分布不均。

　　洗滌?

　　棄去孔內(nèi)液體，每孔加入洗滌液(如含0.05%吐溫-20的PBS)300μl，靜置30秒后棄去，重復(fù)4-6次。

　　最后一次洗滌后需在吸水紙上拍干，避免殘留液體干擾顯色。

　　酶標抗體結(jié)合?

　　加入HRP標記的檢測抗體或酶結(jié)合物工作液(100μl/孔)，37℃孵育30-60分鐘。

　　顯色與終止?

　　加入TMB底物溶液(100μl/孔)，避光反應(yīng)15-30分鐘，觀察顯色梯度。

　　加入終止液(50μl/孔)后，顏色由藍變黃，15分鐘內(nèi)測定OD值。

　　結(jié)果計算?

　　以標準品濃度為橫坐標、OD值為縱坐標繪制標準曲線，計算樣本濃度。

　　二、實驗要求?

　　樣本處理?

　　血清/血漿?：需離心(2000-3000rpm，20分鐘)去除纖維蛋白或抗凝劑干擾。

　　組織樣本?：需勻漿后離心取上清，避免細胞碎片影響檢測。

　　試劑準備?

　　濃縮洗滌液需按比例稀釋(如1:20)，現(xiàn)配現(xiàn)用。

　　酶標抗體和底物需避光保存，使用前平衡至室溫。

　　操作規(guī)范?

　　加樣時需避免氣泡，液體應(yīng)加至孔底而非孔壁。

　　每步孵育后需嚴格洗滌，減少非特異性結(jié)合。

　　質(zhì)量控制?

　　需設(shè)置空白孔、陰性對照和陽性對照，確保實驗有效性。

　　板內(nèi)和板間變異系數(shù)應(yīng)<15%，標準曲線R2≥0.9900。

　　儲存條件?

　　未開封試劑盒需2-8℃保存，避免冷凍或高溫。

　　開封后微孔板應(yīng)密封防潮，部分試劑需-20℃保存。

　　三、注意事項?

　　避免污染?：使用一次性吸頭，不同試劑避免交叉污染。

　　顯色控制?：TMB顯色時間過長可能導(dǎo)致本底升高，需及時終止。

　　數(shù)據(jù)記錄?：需詳細記錄加樣時間、稀釋倍數(shù)等參數(shù)，便于溯源。

　　具體操作請以試劑盒說明書為準。

　　注：以上資料僅供參考，不作為實際標準，具體請咨詢技術(shù)老師。

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