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      大鼠成纖維細胞生長因子受體1(FGFR1)ELISA試劑盒實驗說明

      發表時間:2025/10/14  |  點擊率:150
       
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        大鼠成纖維細胞生長因子受體1(FGFR1)ELISA試劑盒實驗說明如下:

        實驗原理

        ELISA(酶聯免疫吸附試驗)通過特異性抗體捕獲目標蛋白(FGFR1),結合酶標記的二抗和底物顯色反應,實現定量檢測。FGFR1作為受體酪氨酸激酶家族成員,其檢測需注意抗體對跨膜區或胞外結構域的特異性結合?。

        試劑準備

        標準品配制?:需將FGFR1標準品按梯度稀釋(如2.4-0.15 IU/mL范圍),建議使用含0.1% BSA的PBS緩沖液以減少非特異性結合。

        抗體選擇?:推薦使用抗大鼠FGFR1單克隆抗體(如Cell Signaling Technology產品)作為捕獲抗體,多克隆抗體作為檢測抗體。

        封閉液?:常用5%脫脂奶粉或3% BSA封閉未結合位點,室溫孵育1小時。

        操作步驟

        樣本處理?:組織樣本(如腎組織)需裂解后離心取上清,BCA法測定蛋白濃度,建議稀釋至1-10 μg/mL范圍。

        包板與孵育?:

        抗體包被(4℃過夜)后,37℃孵育樣本1小時;

        加入生物素標記二抗,37℃孵育30分鐘;

        加入HRP標記鏈霉親和素,顯色前避光孵育15分鐘。

        顯色與終止?:TMB底物顯色3-5分鐘后,用2M硫酸終止反應,酶標儀讀取450nm吸光度。

        Elisa實驗操作步驟流程:

        實驗前準備

        第一步:配置緩沖液和洗液

        第二步:樣本活化

        第三步:標準品溶解和稀釋

        第四步:包被抗體

        第五步:洗滌

        第六步:顯色反應

        第七步:結果檢測

        數據分析

        標準曲線?:以標準品濃度對數為橫坐標,OD值為縱坐標,擬合四參數邏輯曲線(R2需>0.99)。

        靈敏度?:單克隆抗體ELISA檢測下限可達0.15 IU/mL,多克隆抗體為18.9 IU/mL。

        注意事項

        交叉反應?:需驗證抗體對大鼠FGFR1的特異性,避免與其他FGFR亞型(如FGFR2)交叉反應。

        樣本保存?:組織裂解液需分裝后-80℃保存,避免反復凍融。

        注:以上僅供參考,不作為實際數據,實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。 Elisa試劑盒

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